梯度洗脫可用于處理不能以等度洗脫分離的樣品，而更常見的使用梯度的因素是多成分保留能力不同，無法在等度洗脫中全洗脫出來，或以等度方式無法達(dá)到滿意的分離效果。總結(jié)下來，以下幾種情況，可以采用梯度洗脫：

1、多組分樣品的極性范圍大，用等度無法全部洗脫的樣品；

2、大分子樣品；

3、改善峰峰型；

4、目標(biāo)峰出峰后，短時(shí)間內(nèi)提高有機(jī)相比例，洗脫強(qiáng)保留干擾雜質(zhì)；

5、用等度洗脫無法達(dá)到分離的情況。

在檢測復(fù)雜成分的樣品時(shí)，往往存在些強(qiáng)保留物質(zhì)，采用等度，無法把強(qiáng)保留的雜質(zhì)洗脫下來，一針哪怕采集再久，也會(huì)有未知雜質(zhì)干擾后面進(jìn)樣的效果，這種情況下，可以增加梯度洗脫，使強(qiáng)保留成分在梯度上洗脫出來的方式來解決。

示例：

30分鐘開始，增加梯度洗脫，

以洗去強(qiáng)保留雜質(zhì)，連續(xù)進(jìn)樣，均無干擾

由上面三張圖可見，此中藥，在采用等度洗脫時(shí)，因有強(qiáng)保留未知雜質(zhì)，連續(xù)進(jìn)樣，會(huì)在后面的進(jìn)樣出峰，干擾檢測。在待測成分出峰后，增加梯度，提高有機(jī)相比例，強(qiáng)保留物質(zhì)在當(dāng)針就洗脫下來，連續(xù)進(jìn)樣確認(rèn)，效果能完全重現(xiàn)，后面進(jìn)樣不會(huì)出現(xiàn)未知干擾峰影響。

有些物質(zhì)，特別是結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì)，等度條件下無法達(dá)到分離，而采用梯度模式，因組分在有機(jī)相變化的選擇性差異，可以達(dá)到分離，這種情況下就需要采用梯度條件進(jìn)行測試。

示例：